1.?????? 概述

對(duì)于藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的內(nèi)容，從事分析工作的同學(xué)再熟悉不過，性狀、鑒別、檢查、含量測(cè)定。其中檢查項(xiàng)基本可分為安全性檢查和有效性檢查，如下：

有效性檢查：項(xiàng)目包括大家熟知的可見異物、不溶性微粒、水分、裝量差異、溶出度、溶出曲線、含量均勻度、殘留溶劑、有關(guān)物質(zhì)等等......

安全性檢查：微生物限度檢查和無菌檢查。

安全性檢查是比有效性檢查的項(xiàng)目更加需要關(guān)注和嚴(yán)格制定的。

那么，什么情況下質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中該制定微生物限度？什么情況下該制定無菌檢查？限度又該如何確定？

2.?????? 什么是微生物限度檢查？

微生物限度（藥典中常見的格式表述）? 取本品，照非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查：微生物計(jì)數(shù)法（通則1105）和控制菌檢查法（通則1106）及非無菌藥品微生物限度標(biāo)準(zhǔn)（通則1107）檢查，應(yīng)符合規(guī)定。

微生物限度檢查法：系檢查非規(guī)定滅菌制劑及其原料、輔料受微生物污染程度的方法。檢查項(xiàng)目包括需氧菌總數(shù)、霉菌和酵母菌總數(shù)及控制菌檢查。

微生物計(jì)數(shù)法：用于能在有氧條件下生長(zhǎng)的嗜溫細(xì)菌和真菌的計(jì)數(shù)。其供試品檢查包括三種方法：平皿法（包括傾注法和涂布法）、薄膜過濾法、MPN法，都是根據(jù)計(jì)數(shù)方法適用性試驗(yàn)確定的。MPN法用于微生物計(jì)數(shù)時(shí)精確度較差，但對(duì)于某些微生物污染量很小的供試品，MPN法可能是更適合的方法。

控制菌檢查法：用于在規(guī)定的試驗(yàn)條件下，檢查供試品中是否存在特定的微生物。根據(jù)藥物劑型的不同，包括大腸埃希菌、耐膽鹽革蘭氏陰性菌、沙門菌、銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌、梭菌、白色念珠菌。

計(jì)數(shù)法適用性試驗(yàn)：進(jìn)行產(chǎn)品微生物限度檢查時(shí)，應(yīng)進(jìn)行計(jì)數(shù)方法適用性試驗(yàn)，以確認(rèn)采用的方法適合于該產(chǎn)品的微生物限度檢查。進(jìn)行供試液制備，然后接種和稀釋，各試驗(yàn)菌應(yīng)逐一進(jìn)行微生物回收試驗(yàn)，微生物的回收可采用平皿法（包括傾注法和涂布法）、薄膜過濾法、MPN法。計(jì)數(shù)方法適用性試驗(yàn)中，釆用平皿法或薄膜過濾法時(shí)，試驗(yàn)組菌落數(shù)減去供試品對(duì)照組菌落數(shù)的值與菌液對(duì)照組菌落數(shù)的比值應(yīng)在0.5～2范圍內(nèi)；采用MPN法時(shí)，試驗(yàn)組菌數(shù)應(yīng)在菌液對(duì)照組菌數(shù)的95%置信限內(nèi)。若各試驗(yàn)菌的回收試驗(yàn)均符合要求，照所用的供試液制備方法及計(jì)數(shù)方法進(jìn)行該供試品的需氧菌總數(shù)、霉菌和酵母菌總數(shù)計(jì)數(shù)。

培養(yǎng)基適用性檢查和控制菌檢查方法適用性試驗(yàn)：供試品控制菌檢查中所使用的培養(yǎng)基應(yīng)進(jìn)行適用性檢查。供試品的控制菌檢查方法應(yīng)進(jìn)行方法適用性試驗(yàn)，以確認(rèn)所采用的方法適合于該產(chǎn)品的控制菌檢查。

供試品檢查：按計(jì)數(shù)方法適用性試驗(yàn)確認(rèn)的計(jì)數(shù)方法進(jìn)行供試品中需氧菌總數(shù)、霉菌和酵母菌總數(shù)的測(cè)定。胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基或胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基用于測(cè)定需氧菌總數(shù)；沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基用于測(cè)定霉菌和酵母菌總數(shù)。

結(jié)果判斷

需氧菌總數(shù)：指胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的總菌落數(shù)（包括真菌菌落數(shù)）。

霉菌和酵母菌總數(shù)：指沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的總菌落數(shù)（包括細(xì)菌菌落數(shù)）。若因沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的細(xì)菌使霉菌和酵母菌的計(jì)數(shù)結(jié)果不符合微生物限度要求，可使用含抗生素(如氯霉素、慶大霉素)的沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基或其他選擇性培養(yǎng)基（如玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基）進(jìn)行霉菌和酵母菌總數(shù)測(cè)定。

控制菌檢查：陽性對(duì)照試驗(yàn)應(yīng)檢出相應(yīng)控制菌、陰性對(duì)照試驗(yàn)應(yīng)無菌生長(zhǎng)，檢查結(jié)果以供試品檢查結(jié)果為準(zhǔn)。

除中藥飲片外，非無菌藥品的需氧菌總數(shù)、霉菌和酵母菌總數(shù)照“非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查：微生物計(jì)數(shù)法（通則1105）”檢查；非無菌藥品的控制菌照“非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查：控制菌檢查法（通則1106）”檢查。各品種項(xiàng)下規(guī)定的需氧菌總數(shù)、霉菌和酵母菌總數(shù)標(biāo)準(zhǔn)解釋如下∶

10¹cfu：可接受的最大菌數(shù)為20；

10²cfu：可接受的最大菌數(shù)為200；

10³cfu：可接受的最大菌數(shù)為2000；依此類推。

中藥飲片的需氧菌總數(shù)、霉菌和酵母菌總數(shù)及控制菌檢查照“中藥飲片微生物限度檢查法”（通則1108）檢查；各品種項(xiàng)下規(guī)定的需氧菌總數(shù)、霉菌和酵母菌總數(shù)標(biāo)準(zhǔn)解釋如下∶

10¹cfu：可接受的最大菌數(shù)為50；

10²cfu：可接受的最大菌數(shù)為500；

10³cfu：可接受的最大菌數(shù)為5000；

10⁴cfu：可接受的最大菌數(shù)為50000；依此類推。

限度制定

微生物限度的制定，根據(jù)制劑、原料、中藥提取物的不同，標(biāo)準(zhǔn)會(huì)有不同：

①制劑是非無菌化學(xué)藥品制劑、生物制品制劑、不含藥材原粉的中藥制劑的微生物限度標(biāo)準(zhǔn)見表1：

注：1.化學(xué)藥品制劑和生物制品制劑若含有未經(jīng)提取的動(dòng)植物來源的成分及礦物質(zhì)，還不得檢出沙門菌（10g或10ml）。

?? 2.特殊品種如透皮貼劑等，可采用貼為單位，限度標(biāo)準(zhǔn)以貼計(jì)。

②非無菌含藥材原粉的中藥制劑的微生物限度標(biāo)準(zhǔn)見表2：

③非無菌藥用原料及輔料的微生物限度標(biāo)準(zhǔn)見表3：

④中藥提取物及中藥飲片的微生物限度標(biāo)準(zhǔn)見表4：

3.?????? 什么是無菌檢查？

制劑通則或品種項(xiàng)下要求無菌及標(biāo)示無菌的制劑和原輔料應(yīng)制定無菌限度。包括注射劑、眼用制劑、吸入液體制劑、沖洗劑等，以及用于手術(shù)、嚴(yán)重?zé)齻?yán)重創(chuàng)傷的局部給藥制劑。

無菌（藥典中常見的格式）?? 取本品，經(jīng)薄膜過濾法處理，依法檢查（通則1101），應(yīng)符合規(guī)定。

無菌檢查法系用于檢查藥典要求無菌的藥品、醫(yī)療器具、原料、輔料及其他品種是否無菌的一種方法。若供試品符合無菌檢查法的規(guī)定，僅表明了供試品在該檢驗(yàn)條件下未發(fā)現(xiàn)微生物污染。

無菌檢查應(yīng)在無菌條件下進(jìn)行，試驗(yàn)環(huán)境必須達(dá)到無菌檢查的要求，檢驗(yàn)全過程應(yīng)嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作，防止微生物污染，防止污染的措施不得影響供試品中微生物的檢出。單向流空氣區(qū)域、工作臺(tái)面及受控環(huán)境應(yīng)定期按醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）懸浮粒子、浮游菌和沉降菌的測(cè)試方法的現(xiàn)行國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行潔凈度確認(rèn)。隔離系統(tǒng)應(yīng)定期按相關(guān)的要求進(jìn)行驗(yàn)證，其內(nèi)部環(huán)境的潔凈度須符合無菌檢查的要求。日常檢驗(yàn)需對(duì)試驗(yàn)環(huán)境進(jìn)行監(jiān)測(cè)。

方法適用性試驗(yàn) ?進(jìn)行產(chǎn)品無菌檢查時(shí)，應(yīng)進(jìn)行方法適用性試驗(yàn)，以確認(rèn)采用的方法適合于該產(chǎn)品的無菌檢查。進(jìn)行菌種和菌液制備，采用薄膜過濾法或直接接種法進(jìn)行適用性試驗(yàn)考察。

供試品的無菌檢查 ?無菌檢查法包括薄膜過濾法和直接接種法。只要供試品性質(zhì)允許，應(yīng)采用薄膜過濾法，包括水溶性液體供試品、醇類和油性供試品，或可在水或油性溶劑中溶解的供試品等。供試品無菌檢查的所采用的檢查方法和檢驗(yàn)條件應(yīng)與方法適用性試驗(yàn)確認(rèn)的方法相同。

薄膜過濾法一般應(yīng)采用封閉式薄膜過濾器。無菌檢查用的濾膜孔徑應(yīng)不大于0.45μm，直徑約為50mm。根據(jù)供試品及其溶劑的特性選擇濾膜材質(zhì)。使用時(shí)，應(yīng)保證濾膜在過濾前后的完整性。

直接接種法適用于無法用薄膜過濾法進(jìn)行無菌檢查的供試品，即取規(guī)定量供試品分別等量接種至硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基和胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中。無菌檢查時(shí)兩種培養(yǎng)基接種的瓶或支數(shù)相等。除另有規(guī)定外，每個(gè)容器中培養(yǎng)基的用量應(yīng)符合接種的供試品體積不得大于培養(yǎng)基體積的10%。

結(jié)果判斷

供試品管	陰性管	陽性管	結(jié)果表明
+	-	+	不符合規(guī)定
-	-	+	符合規(guī)定
+或-	+	+	試驗(yàn)無效
	+	-	試驗(yàn)無效
	-	-	試驗(yàn)無效